一、雞傳染性法氏囊病檢測試劑盒
二、通用名稱：（實(shí)時(shí)熒光PCR法）
三、包裝規(guī)格 50T/盒
四、預(yù)期用途：
雞傳染性法氏囊病(IBD)又稱甘波羅病，是由呼腸弧病毒引起的一種急性、高度傳染性疾病。本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理，主要用于雞傳染性法氏囊病的定性篩查檢測及療效評估有重要指導(dǎo)意義。
五、雞傳染性法氏囊病檢測試劑盒原理：
雞傳染性法氏囊病毒檢測試劑盒針對雞傳染性法氏囊病基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含雞傳染性法氏囊病基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。
六、雞傳染性法氏囊病檢測試劑盒組成：
RT-PCR反應(yīng)液、混合酶液、陽性對照、陰性對照。
七、儲存及有效期：
避光-20℃以下保存，避免反復(fù)凍融，有效期為12個(gè)月。
八、適用儀器：ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。
九、注意事項(xiàng)：
1.整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
七、樣品DNA的制備
用自選方法提取Cps DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PGR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
制備Cps標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1、標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6,5,4,3,2和1號。
2、用帶芯槍頭分別加入45μL超純水(最好用帶芯槍頭，下同)
3、先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至0E7拷貝/μL)
4、在6號管中加入5μL10E7拷貝/uL的Cps陽性對照（上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照.
